细胞培养获得成功的关键要素是什么?
1.要保证无菌，包括无菌操作，无菌环境。枪头等要及时灭菌，培养瓶，移液管最好使用一次性的，如果你的细胞比较不好养，最好使用一次性的。
2.要传代的时候细胞传代的数量不能太少，否则细胞不容易养活。另外，传代不要过度频繁，即使是肿瘤细胞。
3.不要经常用胰酶消化细胞，且消化时间不要过长。
4.根据细胞生长情况，即使更换新鲜培养基。
5.血清一般要冻存在-20摄氏度，用的时候在4摄氏度融化，不要反复冻存，最好用10ml的离心管分装使用。
细胞培养一般方法有哪些？谢谢了，大神帮忙啊
1.玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒:1)高压蒸汽灭菌15分钟以上;2)干烤消毒140度2小时以上; 2.无菌工作台先清洗后用75%酒精擦拭干净,紫外线照射40分钟以上;各种培养板照射3小时以上; 3.培养基(pH7.2)和血清配制好后要做无菌试验:将血清按10%加入培养基内,用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶取完全培养基5-10ml置培养箱内培养2-3天,肉眼见无浑浊或沉淀等异物.分装后置-20度保存; 4.消化液(pH7.8)或其它加入液,应用高压蒸汽灭菌或一次性无菌滤器过滤除菌,分装成支置-20度保存; 5.培养箱应先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外线的应照射1小时以上,如有高温灭菌的应按程序来菌).至少每月一次. 6.进入操作时应注意先清洗双手及手腕,然后用75%酒精擦拭,操作时注意无菌台内空间层次.手及物品不要在暴露的瓶口上方来往,如果数量较多,培养瓶应放在与酒精灯平行地方便于操作,瓶与瓶之间应相隔一定的距离,开瓶(盖)时应先用75%酒精反复擦拭或用灯烧,开开后应用灯先烧口,然后烧盖.用完后同样操作.整个操作过程尽量在无菌台靠里面一点。 生物帮上面有的， http://www.bio1000.com/institute/ 生命科学研究所动态,生命科学院所动态,物制品研究所动态。
细胞培养的方法有哪些
轻轻吹打,可先离心（1000rpm. 2,如要高浓度或需更换新培养基,新鲜培养基重悬沉淀,置培养瓶内轻轻摇晃: 1,吸的越干净越好,(根据配制强度经验),镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后. 一,然后收集离心（1000rpm 5min左右）,50ml培养瓶加入消化液约0；也可复苏当时离心（1000rpm 5min左右）后,以免中和后加入的消化液,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落.在无菌台内将完全培养基加入培养瓶内,然后继续进行传代、传代培养首先进行细胞复苏,使细胞基本成单个悬浮,然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞细胞培养首先分为原代培养和传代培养、冻存,取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化,晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2分钟,24h后换液.贴壁细胞.6ml,加入完全培养基继续培养、原代培养需要从组织中消化,去除血清和死细胞,轻轻吹匀后.悬浮细胞,加入完全培养基后继续培养或实验: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,加入2-3ml完全培养基后,适时换液,按此比例进行消化.PBS清洗2-3次,使强度减弱,使细胞均匀后置培养箱内培养: 1,5min左右）后加入完全培养基,完全培养基重悬培养. 2.先将水温锅调至37-38度.应遵守慢冻快融的原则；二、纯化出单细胞、分离. 细胞传代: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养
谁有细胞传代培养具体的操作步骤和注意事项
悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代，或用离心法后，加入新培养基后再吹打分散进行传代贴壁细胞实验需准备超净台喷洒酒精，紫外照射30min。准备好培养瓶/皿，离心管，10%DMEM，0.25%胰酶，D-hanks液等，带上手套，口罩等，倒去旧培养基，用D-hanks液清洗一遍，去除沉积的死细胞等。加入2ml 0.25％胰蛋白酶消化液，消化2～3min，倒置显微镜下观察，待细胞单层收缩突起出现空隙时，倒去酶液。加入1～2滴管含有血清的培养液，反复吹打细胞，使其成细胞悬液。以1：2或1：3进行分装，补充新鲜培养基，并在培养瓶上做好标记，注明代号、日期，轻轻摇匀，37℃CO2培养箱培养。细胞培养24h后，即可观察培养液的颜色及细胞的生长情况。扩展资料：注意事项1、传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染。所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。每次最好只进行一种细胞的操作。每一种细胞使用一套器材。培养用液应严格分开。2、每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。3、如发现细胞有污染迹象，应立即采取措施，一般应弃置污染的细胞，如果必须挽救，可加含有抗生素的BSS或培养基反复清洗，随后培养基中加入较大量的抗菌素，并经常更换培养基等。参考资料：百度百科-传代培养
分子生物学体外细胞培养具体操作过程和注意事项
一、准备工作 准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试。
二、取材 在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。
理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养。取材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时，可将组织块切成黄豆般大的小块，置4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌，同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。
三、培养 将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。
正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察的内容包括细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，培养基的PH是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示），此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查。
原代培养一般有一段潜伏期（数小时到数十天不等），在潜伏期细胞一般不分裂，但可贴壁和游走。过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。每传代一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质，也可能仅有不死性（Immortality）而无恶性。
四、冻存及复苏 为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。
冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都对细胞活力有影响。
五、常用仪器设备 无菌室,超净工作台,三重纯水蒸馏器,抽气泵,压力蒸气消毒器,电热恒温培养箱,培养器具，CO2培养箱,恒温水浴锅,倒置显微镜,离心机,无菌过滤器,洗刷装置,细胞计数板和电子细胞技术仪等等。
如何进行细胞培养
细胞培养（cell culture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。
什么是细胞培养？
美丽的神话《白蛇传》里，有这么一段感人的情节：白娘娘为了救活被吓死的丈夫许仙，闯上终南山，和守山的仙童们大战一场，终于夺下了能起死回生的灵芝仙草，救活了许仙。这个故事又叫《盗仙草》，可说是家喻户晓。现代生物学家发现，“灵芝仙草”并非神话虚构，而是确实存在的一种真菌。它有明显的抗肿瘤作用，所以，说它能“起死回生”也确有道理。遗憾的是，也正如神话中所传说的那样，灵芝只生长在少数地区的深山老林里，产量极低，用来治病救人远远不敷应用。细胞工程的出现，从根本上改变了这一局面。灵芝大量用于治病救人已经变成了现实。当然，那不是原来意义上的灵芝，而是灵芝细胞培养的产物。科学家们将野生的灵芝捣碎后，放在特定的培养基中，控制好温度、光照等条件，灵芝细胞就能迅速繁殖，产生一代又一代新的灵芝细胞。要不了多少天，就可以收获到数百倍的新生灵芝细胞。除了少数细胞留下来投入到又一轮细胞培养之外，大多数收获物被用来提取药用有效成分——灵芝多糖。灵芝多糖神奇的抗肿瘤作用，已经为大量的临床实践所证实。它的生产和应用正在迅速推广之中。人参，被称为“药中之王”，能大补元气，益寿延年。它的强身滋补作用和对多种疾病的治疗作用已经为越来越多的人所认识。然而人参的生产有一个很大的缺陷，那就是栽培期过长。从播种到收获，至少要五年时间。面对着社会对人参的大量需求，细胞工程又出来大显神通了。从70年代起，人参的细胞培养在日本、台湾等地相继获得成功。我国吉林省的科技人员也攻克了这一难关。人参细胞培养的周期是25天左右。在周期结束时，细胞培养物中，人参的主要药理成分——人参皂苷的含量可达6％左右。而一棵栽培了6年的人参，人参皂苷的含量不过是4?5％左右。两相对照，孰优孰劣就很明显了。人参细胞培养还具有不受天灾、病虫害的影响，可连续进行等优点，这就更不是人参栽培所能比拟的了。细胞培养，从原理上来说并不复杂，所需设备也比较简单，但它仍是一门很精巧的技术。比较关键的是确定培养基的配方，特别是针对不同培养物，使用不同种类、不同数量的生长激素。另外，培养的物理条件也很重要。诸如温度、光照、振荡频率等，都需要精心研究，仔细掌握。拿光照来说，人参细胞在白光下生长最快，蓝光、绿光下就要慢一些，红光下生长最慢，几乎和在暗室中生长一样。而有些植物的细胞对光照的反应却正好相反。细胞培养并非局限于植物细胞，动物细胞培养也有它宽广的天地。要进行动物细胞融合、细胞核移植和DNA重组，动物细胞培养技术是必要的准备。另外，它还被用来生产某些珍贵药品，用来检测对人和动物致癌、致畸、致病的有毒物质。至于通过细胞培养来生产猪肉、牛肉、鸡肉，目前还仅仅是设想。这样做在技术上是完全可行的，有待解决的是经济效益问题。医学专家们已经完成了一件惊人之举。那就是，取下人体的一些皮肤细胞进行培养，数十天后就得到一块较大面积的新皮。这块新皮可以移植到大面积的创口上。这对于烧伤病人来说是一个福音。因为传统的做法是从病人身体其他部位切取一块健康皮肤来移植到创口上，可以想象，那是多么痛苦！
细胞培养需要很长时间吗，冷藏的目的是什么
脱落细胞是指自然管腔器官内表面粘膜正常情况下，人体器官粘膜上皮细胞经常有脱落更新，有病变的粘膜上皮细胞，如阴道上皮，支气管粘膜上皮、肾盂膀胱移行上皮、和乳腺导管上皮等都是自然脱落的上皮的细胞。所谓细胞工程，是指以细胞为基本单位进行培养、增殖或按照人们的意愿改造细胞的某些生物学特性，从而创造新的生物和物种，以获得具有经济价值的生物产品。它主要由两部分构成，其一是上游工程，包含细胞培养、细胞遗传操作和细胞保藏三个步骤。另一个则是下游工程，是将已转化的细胞应用到生产实践中去，以生产生物产品的过程。顾名思义，植物细胞工程，当然就是针对植物细胞的细胞工程了，它是细胞工程的一个重要组成部分。 自1904年Hanning成功培养离体胚以来，伴随着相关理论与技术的飞速发展，植物细胞工程也取得了巨大的成就。
细胞培养中加入双抗的作用是什么?双抗又是什么?
双抗就是青链霉素混合液,青链霉素混合液(100X) (Penicillin-Streptomycin Solution）双抗,是专门用于细胞培养的,可以直接添加到细胞培养液内.青霉素-链霉素溶液(100X)中,青霉素的含量为10000U/ml,链霉素的含量为10mg/ml.在细胞培养液中推荐的青霉素的工作浓度为100U/ml,链霉素的工作浓度为0.1mg/ml.
双抗起的作用：抗生素,抑制细菌生长；避免细胞污染
细胞培养PBS的配方是什么？
PBS 1L配方pH7.4：磷酸二氢钾(KH2PO4)：0.27g磷酸氢二钠(Na2HPO4)：1.42g氯化钠(NaCl)：8g氯化钾(KCl)0.2g加去离子水约800mL充分搅拌溶解,然后加入浓盐酸调pH至7.4,最后定容到1L。pbs，中文名称是硫化铅 (真实名称即为硫化铅，不同于锡，铅元素+4价冠“高”，+2价冠“正”），可由硫化氢通入酸性硝酸铅溶液或由碳酸铅与硫加热而制得，是一种蓝色立方晶体。在使用PBS的过程中要特别注意避免溶液被微生物污染。PBS在低温情况下可能会产生沉淀。如果发现有沉淀产生，请置于37℃水浴至完全溶解后再使用。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。用真黑铅、硫磺细末各一斤。先将铅入铁锅中融化，即将硫磺末四五两撒在铅上，黄即发焰，急用铁铲拌炒，所熔之铅即结成砂子。其有未尽结者，又须将硫磺末接续撒其上，勿令火熄，仍不住拌融化之铅，尽结成砂子为度。待晾冷，所结砂子色若铅灰，入药钵细研为粉。去其研之成饼者，所余之粉用芒硝半斤，分三次冲水，将其粉煮过三次，然后入药。
血清应用于细胞培养中的优缺点各是什么
血清应用于细胞培养中的优点：
血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，具有极为重要的功能。
1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。
2. 提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。
3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。
4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。
5.起酸碱度缓冲液作用。
6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。
血清应用于细胞培养中的缺点：
成分不明确，血清保存期短，至多一年。不能排除血清中含有易变物质，使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态。血清可能促进某些细胞的生长(成纤维细胞)同时抑制另一类细胞生长(表皮细胞)。血清含一些对细胞产生毒性的物质，影响细胞生长，甚至造成细胞死亡。 取材中可能带入支原体、病毒，对细胞产生潜在影响可能导致实验失败或实验结果不可靠性。 血清制作过程复杂、批间差异大成分不能保持一致使用使得实验和生产的标准化困难，其中的蛋白质使得某些转基因蛋白生物药品生产中分离纯化工作很难完成。 质量不稳定，价格昂贵，进出口管制影响盈利，使用不方便。
细胞培养的特点
1、能长期传代，保持活性，便于监控检测结构功能和生命活动。
2、培养条件可以人为的控制便于研究细胞代谢、物理、化学、生物因素的影响
3、可用于各种观察和检测手段研究活细胞的变化（变异、分化）。可从细胞水平开展亚细胞结构和代谢分子的表达。
4、研究范围和细胞来源广泛，选择性广。
5、不同代次细胞可长期保存，既可开展同代次不同条件和方法研究，又可观察不同代次的动态变化。
6、耗资少、经济、成本低、可大量培养，利于生物制品的生产。
细胞生物学名词解释： 群体培养
群体培养（mass culture），细胞培养方式大致的一种：指将含有一定数量细胞的悬液置于培养瓶中，让细胞贴壁生长，汇合（confluence）后形成均匀的单细胞层；另一种是克隆培养（clonal culture），将高度稀释的游离细胞悬液加入培养瓶中，各个细胞贴壁后，彼此距离较远，经过生长增殖每一个细胞形成一个细胞集落，称为克隆（clone）。一个细胞克隆中的所有细胞均来源于同一个祖先细胞。此外，为了制取细胞产品而设计了转鼓培养法，使用大容量的圆培养瓶，在培养过程中不断地转动，使培养的细胞始终处于悬浮状态之中而不贴壁。
