蛋白质的常用检测方法
蛋白质测定的方法有双缩脲法、凯氏定氮法、紫外吸收法、酚试剂法等。 蛋白质测定是指通过物理或化学方法对蛋白质含量进行测定。蛋白质是构成人体细胞和组织的重要成分， 人体正常值一般是60～80g/L。蛋白质测定是生物化学和分子生物学研究中最常用、最基本的分析方法之一。蛋白质测定在临床上应用广泛，部分疾病可能导致人体蛋白质含量变化。其中患有多发性骨髓瘤、急性脱水、外伤性休克、肾病可导致人体蛋白质含量增加，患有肝脏疾病、严重烧伤、大出血、营养不良、长期消耗性疾病会导致人体蛋白质含量下降。蛋白质测定在临床上有助于相关疾病的诊断，但并不是绝对的，只是提供一个诊断方向。双缩脲法是检测蛋白质的一个比较简单的方法。这种检测方法的灵敏度比较低一点，但是速度却比较快，一般用20到30分钟的时间就能够有效地检测出人体内蛋白质的含量了。不过通过双缩脲法只能够检测出蛋白质含量多少，并不能够清楚的判断出是哪种蛋白质。因为这种方法检测的时候不同蛋白质的显色程度是相似的，所以就很难辨别了。
鉴别蛋白质的方法有哪些
常见的蛋白质鉴定方法有：
一、最简单的方法就是对所要鉴定的物体进行灼烧
二、使用化学药剂进行化学反应来鉴定蛋白质
三、较为精准的方法是使用仪器进行蛋白质鉴定，如质谱仪等
在生物学研究中经常会遇到一些关于蛋白质鉴定的问题，如单一蛋白质或者简单混合物的鉴定；对单一蛋白质的序列分析等。这一类蛋白质鉴定，在精密度上要求较高，所以几乎都是采用质谱仪器，来对蛋白质进行精密鉴定。
质谱技术是鉴定蛋白质的其中一种平台技术。可用到的质谱仪有Thermo Fisher的Q Exactive质谱仪，LTQ Orbitrap Velos质谱仪，以及AB SCIEX的6500 Q TRAP质谱仪。所在鉴定机构的不同，在硬件品牌的使用上也会有不同。
蛋白质鉴定的流程一般分三大步：蛋白质提取、纯化、鉴定。这个流程是一个将蛋白质层层“解剖”的过程，从中我们可以对蛋白分子量进行测定，蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质进行鉴定，非变性质谱分析以及Pull-down靶蛋白质谱鉴定等，较为细致的去分析蛋白质中的各种物质、性质等。
检测蛋白质用什么试剂
检测蛋白质用双缩脲试剂检测。双缩脲试剂是一种用于鉴定蛋白质的分析化学试剂。它是一种碱性的含铜试液，呈蓝色，由0.1g/mL氢氧化钠或氢氧化钾、0.01g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠配制而成。会遇到蛋白质显紫色。
蛋白质是组成人体一切细胞、组织的重要成分。机体所有重要的组成部分都需要有蛋白质的参与。一般说，蛋白质约占人体全部质量的18%，最重要的还是其与生命现象有关。
检测蛋白质用什么试剂
检测蛋白质用：双缩脲试剂。双缩脲试剂是一种用于鉴定蛋白质的分析化学试剂。它是一种碱性的含铜试液，呈蓝色，由0.1 g/mL氢氧化钠或氢氧化钾、0.01 g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠配制而成。双缩脲试剂本是用来检测双缩脲，由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应。当底物中含有肽键时，试液中的铜与多肽配位，络合物呈紫色。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。双缩脲试剂中真正起作用的是硫酸铜，而氢氧化钾仅仅是为了提供碱性环境，因此它可被其他碱，如氢氧化钠所代替。向试剂中加入碘化钾，会延长试剂的使用寿命。酒石酸钾钠的作用是保护反应生成的络离子不被析出变为沉淀，从而使试剂失效。血清蛋白测定(双缩脲法)试剂：球蛋白沉淀剂同上页酚试剂法。双缩脲试剂：硫酸铜(CuSO4·5H2O,三级试剂)1.5克，酒石酸钾钠(KNaC4H生O6·4H2O,三级试剂)6.0克2.5N氢氧化钠，300毫升，蒸馏水。将硫酸铜及酒石酸分别各以200毫升蒸馏水溶解，必要时过滤，全部倾入1,000毫升容量瓶中，混匀。再加入氢氧化钠溶液并以蒸馏水稀释至1,000毫升刻度。分装塑料或内壁涂蜡的试剂瓶，加塞密封，于室温保存。若溶液中出现暗红色沉淀即不宜再用。
