用小剂量质粒提取试剂盒提取质粒前要做什么工作?
各公司的质粒提取试剂盒大同小异,你这个说明书可能是宝生物的试剂盒。
用试剂盒提,准备工作都比较简单:
1,摇菌;
2,准备ddH2O,无菌枪头和离心管;
3,检查溶液1是否加了Rnase,以及wash buffer是否加了无水乙醇;
3,现在天气冷,检查buffer是否有沉淀,有sds的buffer可能有会有析出,提前开水浴锅,温浴,此外,最后一步加TE或水洗脱质粒时,为提高收获量,在离心前,将柱子在50℃水浴2min更好。
若有疑问,欢迎继续讨论,纯属手打,欢迎采纳,祝实验顺利!
质粒小量提取试剂盒常见问题与解析
质粒小量提取试剂盒常见从1~4mL菌液可以抽提到5~30µg的质粒,纯度高,OD260/OD280比值一般为1.8-2.0之间,质粒可直接用于PCR、酶切、转化测序和体外转录等后续实验。那么在实验过程中常见问题有哪些,下面跟我一起来看一下。
质粒小量提取试剂盒质粒得率低可能原因及解决办法:
1、菌体未活化,生长效率低,菌量少。需要活化菌种。
2、属于低拷贝质粒,增加菌液的量。
3、SolutionB裂解不充分,室温静置5min。
4、最后洗脱体积不够,洗脱液不少于50µL。
质粒小量提取试剂盒质粒纯度差可能原因:
1、SolutionA未加入RNaseA或加入RNaseA的SolutionA 未4℃保存。
2、加入SolutionB剧烈震荡,使得基因组断裂。
3、加入BufferN操作慢,形成微小沉淀,蛋白质无法被充分漂洗干净。
4、BufferW2未加入无水乙醇。
5、OD260/OD280比值一般在1.8-2.0之间,小于1.8可能有蛋白污染,大于2.0有部分降解或RNA污染。
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博凌科为 的 高纯度质粒大提试剂盒 可以快速从大量菌液中最大限度获得高纯度质粒
本试剂盒采用独特的缓冲系统,同时加入TIANGEN公司特制的颜色指示剂,保证更有效地得到大量高纯度质粒。 使用本试剂盒可根据不同的实验需求,灵活地选择处理菌液的初始体积,并采用传统的异丙醇沉淀方法,快速地获得大量高纯度的质粒DNA,满足多种不同的后续实验需求。
产品特点
■ 得率高:异丙醇直接沉淀,最高可获得1.5mg 质粒DNA。
■ 纯度好:经缓冲液P4 和过滤器CS 处理,满足多数转染实验要求。
■ 简便快捷:只需简单的几步离心,1 小时左右完成实验。
■ 应用广泛:适用于酶切、PCR、转化、测序和转染等分子生物学实验,颜色指示剂使您的质粒提取效率更有保证。
保存条件: 室温
谁用过博凌科为的质控型高纯度质粒小量快速提取试剂盒,储存要注意什么呀?我们储存出了问题
储存事项: 1、第一次使用时,将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后(终浓度100ug/ml)置于2-8℃保存。如果溶液P1中RNase A失活,提取的质粒可能会有微量RNA残留,在溶液P1中补加RNase A即可。 2、环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。 3、避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。尤其100XblueLysis含有高浓度乙醇,更要及时封口膜封好,防止挥发。 博凌科为的产品和普通产品的区别在于配有BlueLysis, 它是一种和质粒提取试剂盒配套使用的颜色指示剂。通过在溶液P1里面加入BlueLysis,可以直观地通过颜色的改变监测质粒提取过程中菌体重悬是否充分、裂解是否均一、中和沉淀是否完全,这样可以避免一些常见操作问题(如因为裂解不充分或者中和沉淀不完全造成的产量降低,SDS或者基因组DNA残留影响下游步骤等)。因此特别适合于经验不太丰富初学者和希望确保每个操作正确并得到最大产量的富有经验的研究人员。